点击图片查看原图
【预期用途】
这个ELISA试剂盒是用来对人体骨钙素（1-43）和骨钙素（1-49）（也被称为N端和中部骨钙素或稳定型骨钙素）的浓度进行定量检测。该检测项目可以用来检测人的骨形成活性或者成骨细胞活性，他们与代谢性骨疾病中骨更新率的变化相关，例如骨质疏松，原发性甲状旁腺功能亢进症，甲状腺功能亢进，畸形性骨炎以及肾性骨营养不良。
【简介】
骨钙素[也叫做骨钙蛋白质（BGP）]是骨骼和牙本质中的一种主要的非胶原蛋白质。骨钙素的合成物包括维生素K和维生素D3。新合成的骨钙素部分释放到血流中，部分渗入到骨基质中。骨钙素（1-49）及其片段以及骨钙素（1-43）都会释放到血流中去。在血液循环、肝、肾中，骨钙素（1-49）降解生成稳定型血清骨钙素（1-43）。当抽取人体样本进行体外降解时，同样能生成稳定型血清骨钙素（1-43），因为骨钙素（1-49) C端的六个氨基酸不稳定，在体外时，这六个氨基酸极易在室温下脱落。一些研究证明，临床上对稳定型骨钙素[骨钙素(1-43/49)] 进行测定，其效果更好，它能对骨更新率提供更加精确的评估。
骨钙素由成骨细胞产生，在骨骼形成过程中，它通常作为一个生物化学指标或者生物指标。在用骨形成药物 (如Forteo) 治疗骨质疏松时，通常能观察到稳定型血清骨钙素水平的增高与骨质密度的增加呈现出很强的正相关。在许多药物治疗研究中，骨钙素是骨形成的特定疗效跟踪和评定的首选生化指标。
【检验原理】
这个ELISA的设计，研发和生产的目的是对血清或者血浆样品中稳定型人骨钙素（1-43）和骨钙素（1-49）进行定量检验。该试剂盒是基于运用两种特异性抗体与人骨钙素的不同抗原表位结合的“双位点夹心”技术。
将标准品、质控品、和待测样品加入链霉亲和素包被的微孔板中。随后，加入生物素偶联的人骨钙素N端特异性多克隆抗体和过氧化物酶标记的人骨钙素20-43区域特异性单克隆抗体混合物。经过第一个保温孵育期后，形成了“生物素抗体-人骨钙素-HRP单克隆抗体”的“双位点夹心”结构，该免疫复合体在特异性“链霉亲和素-生物素”亲和结合的作用下被吸附到微孔板的内壁。游离的单抗和缓冲基质则被洗涤剂冲走。微孔板加入过氧化物酶基质（3,3',5,5'-四甲基联苯胺，TMB）并经过一段时间的反应后，测量吸光度。微孔板内壁的免疫复合体的酶活性与样本中人骨钙素的浓度成正比。根据标准品中不同的人骨钙素浓度的吸光度，按照“点到点”或者“4 - 参数法”绘制标准曲线，待测样品中骨钙素浓度可以直接从标准曲线按测量到的吸光度得到。
【组成成分】
1、链霉亲和素包被的微孔板：1块×98个
2、HRP标记骨钙素抗体：1瓶×1.2mL
3、生物素标记骨钙素抗体：2瓶×12mL
4、ELISA 浓缩洗涤液，30X ：1瓶×30mL
5、ELISA HRP基质：1瓶×22mL
6、ELISA终止液：1瓶×12mL
7、人骨钙素标准品：6瓶
8、人骨钙素质控品：2瓶
【 简要实验步骤】
1、添加25µL标准品、质控品和病人样本到指定孔中；
2、在各孔中添加200µL抗体混合物；
3、在室温下，以350 rpm振动培养60分钟；
4、将各孔清洗5次；
5、添加200 µLELISA HRP基质到各个孔中；
6、将微孔板密封，室温下静置20分钟；
7、添加50 µLELISA终止液到各个孔中；
8、读取450 nm的吸光度。