DNA甲基化分析

DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT) 的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化是一种表观遗传修饰，这种DNA修饰方式并没有改变基因序列,但是它调控了基因的表达。大量研究表明，DNA甲基化在生物正常发育、分化、基因表达、基因印记、X 染色体失活等方面具有重要作用，同时DNA 甲基化的异常也同肿瘤与癌症的发生密切相关。

汇智泰康可提供针对单个位点甲基化水平和全基因组甲基化水平的检测服务，采用的主要技术方法有：

用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶（C）被转化为尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶则不变。针对甲基化和非甲基化序列设计引物进行目的拍那段的扩增PCR，通过凝胶电泳或测序检测甲基化状态。

甲基化检测金标准，焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应，适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与Sanger DNA测序法相媲美。

亚硫酸盐处理DNA时：胞嘧啶（C）不发生变化，而未甲基化的胞嘧啶（C）转变成胸腺嘧啶（T），样品中的 GC 含量发生了变化，最终被转化成了熔解曲线 Tm 值之间的差异。

采用LC-MS/MS分析方法检测DNA水解产物中5-甲基-2’脱氧胞苷（5-mdC）和2’-脱氧胞苷（dC），以最被广泛采用的w ( 5mdC ) / [w( dC ) + w ( 5mdC ) ] 100% (单位为ng /ng DNA )的方式来表征DNA 甲基化的水平。