本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争三聚氰胺抗体,加入酶标记物后,用底物显色,样本吸光值与其所含残留物三聚氰胺的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应三聚氰胺的含量。
二、试剂盒检测限
试剂盒检测限: 10 ng/mL
三、 试剂盒组成
1.预包被板:96T
2.标准品液:(1mL/瓶) 0 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL
3.酶标记物 12 mL
4.抗体工作液 7 mL
5.底物缓冲液 7 mL
6.底物液 7 mL
7.终止液 7 mL
8.20倍浓缩洗涤液 50 mL
四、样本处理
配制样品稀释液:
称取89.5 g Na2HPO4·12H2O ,蒸馏水定容至1000 mL。
湿的宠物食品萃取方法(稀释100倍)
1.匀质样品到布丁状;
2.称取2 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡;
3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层;
4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将其收集于干净试管中;
5.用样品稀释液将滤液20倍稀释;
6.取50 μL进行实验。
干的宠物食品萃取方法(稀释200倍)
1.均质干的宠物饲料样品;
2.称取1 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液,并剧烈振荡;
3.超声萃取1 min,漩涡混合1 min,然后静止5 min,使样品分层;
4.5000 r/min室温离心5 min,用玻璃纤维滤纸过滤上清液,并将萃取液收集于干净试管中;
6.用样品稀释液将滤液20倍稀释;
7.取50 μL进行实验。
液态奶/乳饮料(稀释5倍)
1. 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中,冷藏至4℃备用;
2. 将1 mL液态奶或乳饮料样品置于离心机中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),分离样品中脂肪;
3. 弃上层脂肪,取0.2 mL离心后的脱脂液态奶或乳饮料试样于干净试管中;
4. 加入0.8 mL样品稀释液于离心后的脱脂液态奶或乳饮料中,振荡混匀样品,取50 μL进行实验。
奶粉(稀释25倍)
1. 称取1 g奶粉样品于干净试管中;
2. 加入5 mL的45~50℃温水溶解奶粉并混匀后冷藏至4℃备用;
3. 取1 mL溶解好的奶粉试样于离心管中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),弃上层脂肪,取0.2 mL试样于干净试管中;
4.加入0.8 mL样品稀释液于试管中,振荡混匀取50 μL进行实验。
酸奶:(稀释5倍)
1. 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中,将PH值调至6~8,冷藏至4℃备用;
2. 将1 mL样品置于离心机中,5000 g离心10 min(建议10℃低温离心),弃上层脂肪,取0.2 mL试样于干净试管中;
3. 加入0.8 mL样品稀释液于试管中,振荡混匀取50 μL进行实验。
初乳样品:(稀释1倍)
直接法:将样品4℃冷藏30 min后,4000 r/min离心15 min,弃去上层脂肪,取50 μL进行实验。