拟南芥是植物领域应用较为广泛的模式生物。由于具有较小的基因组(135 Mbp),生命周期短,可以在多种环境下生长,一直被视为研究植物遗传学、进化、种群遗传学和植物生长发育的系统。
农杆菌介导的蘸花法是目前相对成熟、应用较为广泛的拟南芥稳定遗传转化方法。转化步骤大致如下:拟南芥(T0代)的花序浸没在一定浓度的含有目标转化质粒的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)(常用的根癌农杆菌菌株为GV3101)悬浮液中,然后放在一定条件下进行培养(图1 a-e)。待植物成熟后收集T0代植物的种子,将这些种子放在含有特定抗生素的培养基上进行生长筛选(图1f),获得阳性植株。与其他植物转化方法相比,蘸花法需要较少的人力和专用试剂,所需设备相对简单且转化效率较高(在优化的条件下大于1%)(1)。
图 1. 拟南芥蘸花法简要过程(2)。
拟南芥瞬时转化常用的有农杆菌介导的叶片转化、基因枪轰击和聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化等方法。拟南芥的瞬时转化为研究启动子活性、蛋白的亚细胞定位和蛋白相互作用等提供了支撑。
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