台盼蓝检测活性

实验介绍：

正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。并且操作非常简单。

操作步骤：

1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；

2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；

3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液；

4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；

5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；

6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；

7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；

8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；

9. 统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率。

细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100

注意事项：

1. 染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结果偏低；

2. 另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。

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