羰基含量测定试剂盒

产品编号：ZDK-005Z                                                                                                                                                                                                                               规格：100T

该产品由军事医学科学院研发监制

一、   原理

    天然蛋白质分子中氨基酸残基不含有羰基，但活性氧在金属离子的介导下，可使氨基酸残基中自由氨基或亚氨基氧化最终生成NH₃和相应羰基衍生物。羰基衍生物可和2，4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯腙衍生物，后者在387nm处有强吸收。通过测定羰基水平可以表征蛋白质分子是否受到活性氧氧化损伤。

二、试剂组成

A. 检测缓冲液（含盐酸胍）    250ml

B. 2、2，4-二硝基苯肼试剂    25ml

三、样品制备

1. 测定每一蛋白质时需要参考有关文献分离提取该蛋白质。

2. 血清和组织液（如关节液、淋巴液）可直接测定。

3. 组织脏器总羰基测定：用20mM pH6.4磷酸缓冲液按20%（W∕V）制成匀浆，3000rpm离心10min,取上清测定。

四、测定步骤

1．取A试剂和B试剂按9：1体积混合，混合液为AB液。

2．取AB液2.5ml加入0.5ml样品液，于25℃反应30min。

3．对照设置：用2.5ml A试剂加入0.5ml样品液。

4．用分光光度计于387nm测定吸光值。

五、计算

1．蛋白质或酶羰基含量计算

计算公式：

2．体液羰基含量计算

计算公式：A3874.3482=µMol/ml体液

3．组织羰基含量计算

计算公式=A3874.3485=µMol/g 组织

六、注意事项及说明

1．A387为387nm处吸光值。

2．用直径为1cm比色杯比色。

3．样品蛋白质浓度要大于5mg/ml。

七、保存条件

    室温保存，有效期一年。