点击图片查看原图
- 基于CRISPR的基因敲除的慢病毒载体构建与包装
维洛信提供基于CRISPR/Cas9系统的慢病毒载体构建预包装服务，根据目的基因设计short guide RNA (sgRNA) 序列并构建入我们专有的慢病毒载体，进而断裂DNA双链，实现对基因的精确敲除。
慢病毒优势：
1. 广泛宿主细胞：与逆转录载体不同，能够感染分裂期与静止期细胞；包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白，宿主范围更广，包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。
2. 极强感染能力：慢病毒载体具有极高的感染效率，尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。
3. 长期稳定表达：外源基因整合入基因组，实现持久性表达，可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。
4. 低免疫原性：体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。
5. 高安全系数：尚未发现对人的致病性，已被应用于临床治疗；采用三质粒包装系统，去除致病基因和辅助序列，包装质粒和载体质粒尽量降低同源性，进一步提高了生物安全性。
服务流程：
1. 方案沟通
2. 基因克隆：将目的基因片段构建入我们的专有慢病毒转移质粒，测序验证
3. 病毒包装：三代慢病毒包装系统（转移质粒 + 包装质粒 + 包膜质粒）共转染入293T细胞
4. 收毒：48 h、72 h孵育后收获培养上清
5. 纯化浓缩：超速离心+超滤， 去除杂质蛋白和DNA；根据不同要求，我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩
6. 质量控制：
- 多重酶切质粒鉴定
- p24 ELISA核心蛋白定量
- 细胞转导检测（带有荧光标签）
- qPCR检测病毒滴度
交付内容：
定制慢病毒颗粒
对照病毒（可用于转导测试）
详细实验报告
维洛信慢病毒平台：
1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺，力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品
2. 多种优化启动子（CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等）与报告基因（EGFP、mCherry、EYFP等）或药筛基因（Neo, Puro, Hygromycin等）可供选择，满足您的不同需求
3. 滴度高：维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒，满足大部分实验的使用要求
4. 灵活生产：我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒（小规格、中规格、大规格）的制备服务
5. 具有竞争力的价格与货期
针对不同应用方向，我们提供以下慢病毒制备服务：