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本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的三聚氰胺和微孔条上预包被的偶联抗原竞争三聚氰胺抗体，加入酶标记物后，用底物显色，样本吸光值与其所含残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应三聚氰胺的含量。
二、试剂盒检测限
试剂盒检测限： 10 ng/mL
三、 试剂盒组成
1．预包被板：96T
2．标准品液：（1mL/瓶） 0 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL
3．酶标记物 12 mL
4．抗体工作液 7 mL
5．底物缓冲液 7 mL
6．底物液 7 mL
7．终止液 7 mL
8．20倍浓缩洗涤液 50 mL
四、样本处理
配制样品稀释液：
称取89.5 g Na2HPO4·12H2O ，蒸馏水定容至1000 mL。
湿的宠物食品萃取方法（稀释100倍）
1．匀质样品到布丁状；
2．称取2 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并剧烈振荡；
3．超声萃取1 min，漩涡混合1 min，然后静止5 min，使样品分层；
4．5000 r/min室温离心5 min，用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将其收集于干净试管中；
5．用样品稀释液将滤液20倍稀释；
6．取50 μL进行实验。
干的宠物食品萃取方法（稀释200倍）
1．均质干的宠物饲料样品；
2．称取1 g样品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并剧烈振荡；
3．超声萃取1 min，漩涡混合1 min，然后静止5 min，使样品分层；
4．5000 r/min室温离心5 min，用玻璃纤维滤纸过滤上清液，并将萃取液收集于干净试管中；
6．用样品稀释液将滤液20倍稀释；
7．取50 μL进行实验。
液态奶/乳饮料（稀释5倍）
1． 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中，冷藏至4℃备用；
2． 将1 mL液态奶或乳饮料样品置于离心机中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），分离样品中脂肪；
3． 弃上层脂肪，取0.2 mL离心后的脱脂液态奶或乳饮料试样于干净试管中；
4． 加入0.8 mL样品稀释液于离心后的脱脂液态奶或乳饮料中，振荡混匀样品，取50 μL进行实验。
奶粉（稀释25倍）
1． 称取1 g奶粉样品于干净试管中；
2． 加入5 mL的45～50℃温水溶解奶粉并混匀后冷藏至4℃备用；
3． 取1 mL溶解好的奶粉试样于离心管中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），弃上层脂肪，取0.2 mL试样于干净试管中；
4．加入0.8 mL样品稀释液于试管中，振荡混匀取50 μL进行实验。
酸奶：（稀释5倍）
1． 准确吸取1 mL液态奶或乳饮料于干净离心管中，将PH值调至6～8，冷藏至4℃备用；
2． 将1 mL样品置于离心机中，5000 g离心10 min（建议10℃低温离心），弃上层脂肪，取0.2 mL试样于干净试管中；
3． 加入0.8 mL样品稀释液于试管中，振荡混匀取50 μL进行实验。
初乳样品：（稀释1倍）
直接法：将样品4℃冷藏30 min后，4000 r/min离心15 min，弃去上层脂肪，取50 μL进行实验。