深圳市百恩维生物技术有限公司

人免疫细胞无血清培养基BW12002是百恩维生物开发，可用于人免疫细胞临床治疗研究的无血清培养基，生产过程符合cGMP的标准规范。可用于人类体外组织及细胞培养过程中的应用。

人免疫细胞无血清培养基

BW12002

500ml，1000ml

1、无血清培养基，无添加细胞因子

2、无异源动物成分，化学成分限定培养基

3、培养性能优越，支持高密度单核细胞培养

1、DC细胞、CIK细胞和NK细胞的长期增殖培养

2、PBL细胞和TIL细胞的长期增殖培养

3、单核细胞和巨噬细胞的长期增殖培养

4、T淋巴细胞的长期增殖培养

培养过程：

以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则。如需在生物反应器或培养袋高密度培养，应优化条件来确定最佳的操作步骤。

T细胞培养：

1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）；或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37°C的水浴，快速解冻（<1分钟）冷冻小瓶的外周血单个核细胞

2、用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2-5％的热灭活的的人自体血浆。

3、计数细胞可以使用电子（即Coulter计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）。

4、离心细胞，清除洗涤缓冲液。

5、培养初期，用含细胞因子（如IL-2）的培养基重悬PBMC；CD3 + T细胞密度保持在大约0.5-1×10 ⁶/ mL。转移细胞到相应的细胞培养容器（培养袋、培养瓶）。随后可应用各种操作激活T细胞，包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。

6、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中，在37°C，5％CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞，需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期，当细胞密度超过1×10 ⁶/ mL时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×10 ⁶/ mL（例如，2×10 ⁶个细胞/ mL以上，按1:4比例0.5x106细胞/ mL）。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换，建议培养基深度不超过1到1.2厘米。

单核细胞树突状细胞培养：

1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。

2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中，用加入25 mL免疫细胞无血清培养基（货号BW12002）。

3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育23小时。

4、弃掉含非贴壁细胞的培养基。

5、用生理盐水洗涤贴壁细胞（主要是CD14 +单核细胞）三次。

6、往免疫细胞无血清培养基添加50至100 ng / mL的重组人IL-4和50 ng / mL的重组人GM-CSF。细胞密度应介于1~3x10⁵细胞/ mL之间。研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。

7、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中连续孵育5天。培养3天左右换液。同时添加IL-4和GM-CSF。

8、 6天之后，细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a，CD80，CD86，HLA-DR）。

9、向培养基中添加1μg/ mL的LPS或者50μl/mL的TNF-α诱导的树突状细胞的成熟。

 注：对于贴壁单核细胞也可以被磁珠分离。

2～8℃避光保存。

14个月

冰袋运输