siRNA表达载体构建
近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcript ional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。通过构建siRNA表达载体这种方法来制备siRNA,已成为进行RNA干扰实验的常用手段之一。
目前百恩维生物能够为您提供包括siRNA 靶序列设计、质粒构建、测序等全方位服务。
1、siRNA表达载体的选用:百恩维生物选用的siRNA 表达载体含人的U6启动子、Pol Ⅲ 终止子、氨苄抗性基因,可以建立稳定表达系。
2、设计siRNA靶序列:
根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19 - 21nt 长。百恩维生物亦可针对客户的需求来设计,由客户选择靶位点数量。
对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt) 相连,称为 shRNA(short hairpin RNA)。
3、百恩维生物提供阴性对照和阳性对照载体。
siRNA质粒载体构建:合成模板、双酶切siRNA空载体、连接与转化、测序鉴定、质粒制备及定量。
提供实验结果: 质粒、甘油菌、测序结果等。